其他实验服务细胞实验

细胞培养

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价格￥2000
单位批
货号HKF6001
品牌浩克

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服务介绍：

货号	名称	规格	价格
HKF6001	细胞培养	批	2000元

　简介：
　　细胞培养是采用无菌操作的方法，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养.使其不断地生长、繁殖，从而观察细胞的增殖、分化以及细胞衰老等过程的生命现象。常见的细胞培养方式可分为贴壁和悬浮两种。细胞培养的常规操作包括：
1)细胞的接种和传代
2)细胞计数
3)细胞的复苏和冻存。
细胞培养方法：
　　1、完全培养基配置：培养基的配制(需在超净台内无菌操作)：10%FBS+90%培养基(根据细胞的种类分为DMEM/F12、DMEM/HIGH、
MEM/EBSS、改良型RPMI-1640培养基)。
　　2、细胞复苏：
a. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
b.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。
c.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的培养瓶中前后左右轻轻摇动，使培养瓶中的细胞均匀分布。
d.标好细胞种类和日期等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
e. 3天换一次培养基。
　　3、细胞传代：
a. 培养瓶中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
b.把原有培养基吸掉。
c.加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。
d.细胞都变圆后吸出胰酶终止消化。
e.加入20ml的完全培养基，移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。
f.根据细胞种类把细胞传到几个培养瓶中。一般，癌细胞分4个，正常细胞传3个。继续培养。
　　4、细胞冻存：
把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。
4℃30min，-20℃30min，-80℃过夜，然后放到液氮罐中保存。
冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

样本寄送须知：

　　1.活细胞：一定要不透气方瓶寄，常温;

　　2.冻存细胞：纯干冰件，保证干冰充足

无

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　常用的细胞培养基：

名称	成份	适用细胞类型	备注
MEM	BSS＋12种氨基酸＋谷氨酰胺＋8种维生素	各种传代细胞系和原代细胞	在此基础上改良的培养基有BEM、DMEM
DMEM	改良自MME，各成分量加倍	贴附型肿瘤细胞，CHO细胞	分低糖（5.5mM）、高糖（25mM）型，高糖型较常用
RPMI-1640	BSS＋21种氨基酸＋维生素11种等	悬浮细胞，正常细胞，肿瘤细胞	最初针对淋巴细胞设计
L15	半乳糖替代了葡萄糖;磷酸盐缓冲体系	快速增殖瘤细胞，CO2缺乏	以半乳糖代替了葡萄糖
McCoy5A	BSS＋40种成分	原代细胞，淋巴细胞，组织活检细胞	最初为肉瘤细胞设计
DMEM/F12	高浓度与成分多样化	原代培养及更难养的细胞系	F12与DMEM等体积混合，可作为开发无血清培养基的基础配方

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