荧光双标信号放大试剂盒 （冰冻切片、细胞爬片适用）

荧光双标信号放大试剂盒(冰冻切片、细胞爬片适用)

货号：HKI0000-2A

【产品信息】

产品名称	产品货号	规格	有效期
Flare520	HKI0014	5mL/100T	12 个月
Flare570	HKI0015
POLY-HRP羊抗兔/鼠通用二抗	HKI0029
DAPI染色液 (即用型)	HKI0005
抗荧光淬灭封片剂	HKI0007
抗体洗脱液	HKI0045	5ml
TSA荧光信号增强剂	HKI0046	50ul
内源性过氧化物酶阻断剂	HKI0047	20ml

【产品简介】

酪酰胺信号放大 (TSA) 系统可用于检测荧光免疫细胞化学 (ICC) 、免疫组织化学 (IHC) 中的低丰度靶点，可将信号灵敏度提高100倍。TSA 荧光试剂盒使用辣根过氧化物酶 (HRP) 直 接催化固定化酶周围的荧光基团共价沉积，形成永久性共价键结合。在运用HRP二抗及一抗在室 温下由抗体洗脱液脱离掉抗原失活的原理，重复此过程，即可实现同种属荧光双标及荧光三标 以及多标 (注：此过程仅适用于冰冻切片、细胞爬片的荧光多标) 。

此试剂盒中的荧光探针可单独或配合使用。可以实现单标、双标或荧光放大等功能不受 一抗种属的影响，极大丰富了荧光多色的内容。

【储存与运输】

冰袋 (wet ice) 运输；-20℃长期保存,短期于4℃保存，有效期 12 个月。

【使用方法】

细胞爬片

1.固定通透

在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min，用4%多聚甲醛固定15min，PBS浸洗3 此，每次3min。细胞通透剂 (货号：HKI0048) 室温通透20min (细胞膜上表达的抗原可省略) 。

2.封闭处理

PBS浸洗3次，每次3min，吸水纸吸干PBS，滴入封闭液 (货号：HKW2085/86/87/99) 完全覆盖细 胞，室温封闭30min。

3.一抗孵育

弃掉封闭液，滴加用通用抗体稀释液 (货号：HKW2083) 按一定比例稀释的一抗并放入湿盒，4℃孵育

过夜 (或37℃湿盒孵育2h) 。

4.二抗孵育

PBST浸洗3次，每次3min，吸干多余液体滴加稀释好的与一抗相应种属的HRP标记二抗，湿盒中 37℃孵育1h，PBST浸洗3次，每次3min。

5.加TSA 信号放大试剂

根据需要标记的荧光颜色加对应的TSA 信号放大试剂，孵育3-10min可具体根据预实验条件。 如遇标记效果差的可添加荧光增强剂进一步加强，增强剂:荧光试剂1:500正常孵育，浓度也 可摸索使用。

6 . 荧 光 多 色 实 现

抗体洗脱液37℃预热至完全溶解，滴加足量抗体洗脱液完全覆盖细胞，37℃放置8分钟，弃去洗脱液， 再次滴加足量抗体洗脱液完全覆盖细胞，37℃放置8分钟，弃洗脱液，PBS浸洗3次，每次5min，洗脱掉 一抗及相应二抗，再重复步骤3-5，实现荧光多色。

7 . D A P I 复 染 细 胞 核

8 . 抗 荧 光 淬 灭 封 片 剂 封 片

9 . 相应荧光通道拍照或扫描

冰冻切片

1. 复温固定

冰冻切片室温防置30min后，入纯甲醇固定10min。  (亦可采用其他固定方式)

2.阻断内源性过氧化物酶和血清封闭

PBS浸洗切片3次，每次5min，用过氧化物酶阻断剂 (货号：HKI0047) 孵育25min，阻断内源性过氧化 物酶，滴入封闭液 (货号：HKW2085/86/87/99) 37℃孵育20min。

3.一抗孵育

弃掉封闭液，滴加适当比例稀释的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜。

4.二抗孵育

PBST浸洗3次，每次3敏，吸干多余液体滴加稀释好的与一抗相应种属的HRP标记二抗，湿盒中37℃ 孵育1h，PBST浸洗3次，每次3min。

5.加TSA信号放大试剂

根据需要标记的荧光颜色加对应的TSA 放大试剂，孵育3-10min可具体根据预实验条件。如遇 标记效果差的可添加荧光增强剂进一步加强，增强剂:荧光试剂1:500正常孵育，浓度也可摸 索使用。

6 . 荧光多色实现

抗体洗脱液37℃预热至完全溶解，滴加足量抗体洗脱液完全覆盖组织，37℃放置8分钟，弃去洗脱液， 再次滴加足量抗体洗脱液完全覆盖细胞，37℃放置8分钟，弃洗脱液，PBS浸洗3次，每次5min，洗脱掉 一抗及相应二抗，再重复步骤3-5，实现荧光多色。

7 . DAPI复染细胞核

8 . 抗荧光淬灭封片剂封片

9 . 相应荧光通道拍照或扫描

【注意事项】

1.本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3.HRP超敏山羊抗兔鼠通用二抗属于附赠试剂，不足100T剂量，可根据需要回购。

4.样本来源为兔 (或小鼠) ，若出现较高非特异性荧光着色，一抗为兔抗 (或鼠抗) 时，可 采用HRP标记的山羊抗兔IgG(货号：HKS23303) 或HRP标记的山羊抗小鼠IgG (HKS23301) 。