免疫组化（芯片）

【产品信息】

• 实验原理

服务介绍：

　　组织芯片免疫组化染色,是将多种组织以规则的微阵列方式排列于同一载体上，同时进行相同指标的免疫组化检测。组织芯片具有体积小, 标本信息含量大 , 一次性实验即可获大量结果。实验条件更易控制一致，减少批间批内误差，结果更准确。节省试剂，节省人力物力等优点。

• 实验器材及试剂

1.主要实验器材

2.主要实验试剂

• 实验步骤
• 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min -无水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min- 85%酒精6min，自来水洗2min。
• 抗原修复：组织切片置于盛满xxxx抗原修复缓冲液（PH ）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min至沸，停火8min保温再转中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
• 阻断内源性过氧化物酶：切片加上3%的双氧水，室温孵育25min，将玻片置PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
• 画圈：用组化专用的组化笔沿着组织外围轮廓画一个与组织间隔3-4毫米的小圈，然后加入足量的PBS保证后续依次加入的封闭血清，一抗，二抗，以及显色剂能完全覆盖组织，而不沿着玻片流走。
• 血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织，室温封闭30min。
• 加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加按一定比例配好的对应一抗，切片平放于湿盒4°过夜孵育。
• 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加相对应的二抗覆盖组织，室温孵育50min。
• DAB显色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加（稀释液和浓缩液1000:50配制）新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，纯水冲洗切片终止显色。
• 复染细胞核：苏木素染色2-3min左右，自来水洗，分化液分化2秒，自来水冲洗，返蓝液返蓝15-30s，流水冲洗。
• 脱水封片：将切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min -95%酒精5min -无水乙醇5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min 中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片.
• 显微镜镜检，图像采集分析。
• 结果判读：

苏木素染出细胞核为蓝色，DAB显出的阳性表达为棕黄色

• 注意事项：

1． 注意切片脱蜡是否彻底；

2． 实验过程中切片勿干片；

3.  实验操作中小心枪头挂伤组织。