杭州浩克生物
载体构建
1504服务内容 载体构建服务与蛋白表达服务相配套，服务内容主要指将目的基因连接到大肠杆菌表达系统适用的表达质粒，如常用pET系列，pGEX系...
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【产品信息】
| 产品名称 | 产品货号 | 规格 | 价格 |
| 四标建模（非常规） | HKF2013 | 套 | 3500元 |
石蜡切片免疫荧光实验步骤
1、 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-无水乙醇Ⅰ6min -95%酒精6min-85%
酒精6min蒸馏水洗。
2、 抗原修复：组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复液（PH6.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min
停火8min中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
3、 阻断内源性过氧化物酶：切片加上3%的双氧水，室温孵育25min，将玻片置PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
4、 血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织，室温封闭30min。
5、 加一抗：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加按一定比例稀的抗体覆盖组织。切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。
6、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织，避光室温孵育50min。
7、 信号放大:将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min 。滴加相对应颜色Flare信号放大试剂，3-5min.将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min 。双标或者多标的实验从这一步结束后重复步骤2-7，标记第二个、或者第三个抗体，最后在进入步骤8即可。
8、DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加
DAPI染液，避光室温孵育10min。
9、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
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