实验服务成像分析扫描

荧光扫描（四标）

实验服务成像分析扫描

价格￥300
单位张
货号HKF4019
品牌浩克

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【产品信息】

产品名称	产品货号	规格	价格
荧光扫描（四标）	HKF4019	张	300元

石蜡切片免疫荧光实验报告

一、实验器材及试剂

实验器材

名称	厂家	型号
脱水机	湖北贝诺医疗科技有限公司	JT-12S
生物组织自动包埋机	湖北贝诺医疗科技有限公司	JB-L5
转轮式切片机	徕卡显微系统上海有限公司	HistoCoreBIOCUT
石蜡包埋机（冷台）	湖北贝诺医疗科技有限公司	JB-L5
KD-P组织摊片机	浙江金华科迪仪器设备有限公司	51A011
烤箱	天津市莱玻特瑞仪器设备有限公司	GFL125
载玻片及盖玻片	江苏汇达医疗器械有限公司	710510
微波炉	美的	M1-L213B
脱色摇床	上海琪特分析仪器有限公司	STS-3
涡旋仪	秒生科技有限公司	SI-A256
移液枪	Dragon	KE003068
组化笔	Gene tech	GT1001
荧光显微镜	NIKON	ECLIPSE C1

主要实验试剂

试剂	厂家	货号
无水乙醇	杭州宏达化工仪器有限公司	SJ003614
二甲苯	国药集团化学试剂有限公司	10023418
20xTRIS-EDTA修复液（PH8.0）	杭州浩克生物技术有限公司	HKI0003
PBS缓冲液	杭州浩克生物技术有限公司
BSA	杭州浩克生物技术有限公司	HK5021
一抗：xxx绿
二抗：HRP超敏山羊抗兔鼠通用二抗	杭州浩克生物技术有限公司	HKI0029
Flare520绿	杭州浩克生物技术有限公司	HKI0014
DAPI（即用型）	杭州浩克生物技术有限公司	HKI0005
抗荧光淬灭封片剂	杭州浩克生物技术有限公司	HKI0007-1

石蜡切片免疫荧光实验步骤
石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-无水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min-85%酒精6min-蒸馏水洗。
抗原修复：组织切片置于盛满EDTA修复液（PH8.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min停火8min中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
阻断内源性过氧化物酶：切片加上3%的双氧水，室温孵育25min，将玻片置PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
血清封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织，室温封闭30min。
加一抗：切片稍甩干后在圈内滴加按一定比例稀的抗体覆盖组织。切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。
加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织，避光室温孵育50min。
信号放大:将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min 。滴加相对应颜色Flare信号放大试剂，3-5min.将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min 。
DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
镜检拍照：切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像，根据对应波长选择相应通道。