CCK8

服务介绍：

操作步骤

1. 制作标准曲线（测定细胞具体数量时进行次操作）

A) 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
B) 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5 个细胞浓度梯度，每组 3-6 个复孔。
C) 接种后培养至细胞贴壁，然后加 CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD 值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8 后的培养时间）。

2. 细胞活性检测

A) 在 96孔板中接种细胞悬液（100 µL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在 37℃，5% CO₂ 的条件下）。

B) 向每孔加入 10 µL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数）。

C) 将培养板在培养箱内孵育 2小时。

D) 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

E) 如果暂时不测定 OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 h内吸光度不会发生变化。

3. 细胞增殖-毒性检测

A) 在 96 孔板中配置 100 µL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时（在 37 ℃，5% CO2 的条件下）。

B) 向培养板加入 10 µL 不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24 或 48 小时）。

C) 向每孔加入 10 µL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数）。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。

D) 将培养板在培养箱内孵育 2小时。

E) 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

F) 如果暂时不测定 OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 µL 0.1M 的 HCl 或者 1% SDS (W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。

4. 活力计算：.

细胞活力（％）=[A(加药)－A(空白)]／[ A(0 加药)－A(空白)]×100

A（加药）：具有细胞、CCK-8 溶液和药物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培养基和 CCK-8 溶液而没有细胞的孔的吸光度

A（0 加药）：具有细胞、CCK-8 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力