一、实验器材及试剂
1、实验器材
名称 | 厂家 | 型号 |
脱水机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JJ-12J |
包埋机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JB-P5 |
病理切片机 | 上海徕卡仪器有限公司 | RM2016 |
冻台 | 武汉俊杰电子有限公司 | JB-L5 |
组织摊片机 | 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 | KD-P |
烤箱 | 天津市莱玻瑞仪器设备有限公司 | GFL-230 |
载玻片 | haokebio | |
正置光学显微镜 | 日本尼康 | Nikon Eclipse E100 |
成像系统 | 日本尼康 | Nikon DS-U3 |
2、主要实验试剂
试剂名称 | 厂家 | 货号 |
无水乙醇 | 国药集团化学试剂有限公司 | 100092683 |
二甲苯 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10023418 |
富尔根染液套装 | haokebio | G1048 |
盐酸 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10011008 |
中性树胶 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10004160 |
二、实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。
2、稀盐酸染色:配制1M的盐酸,置于60℃的烤箱中预热。将切片放入已预热好的1M的盐酸中于60℃烤箱中浸染30min,取出切片用常温的1M盐酸稍洗一下,蒸馏水洗3遍。
3、雪弗染色:切片入雪弗染液中暗处理60-90min,不水洗;
4、偏重亚硫酸钠染色:切片直接入偏重亚硫酸钠浸洗2次,每次2min,流水冲洗5min;
5、固绿染色:切片入固绿染液中10s至2min,无水乙醇三缸脱水。
6、透明封片:切片入二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。
7、显微镜镜检,图像采集分析。
三、结果判读:
核DNA呈紫红色,细胞质和其他成分呈淡绿色。
四、注意事项:
1、雪弗染色前要用蒸馏水洗干净,染色时要避光。
2、固绿染色时,要边染边看,背景不能太深也不能过浅。
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