一、实验器材及试剂

　　1、实验器材

　　2、主要实验试剂：
 

　　二、染色步骤

　　1、工作液配制：Tris碱5g+氯化钙0.499g+蒸馏水定容至250ml，室温保存。‚取染液中合适的量，用盐酸调PH至10.4。ƒ取染液中合适的量，每10ml的量加15mg的ATP钠盐，充分溶解，调PH至9.4。

　　2、工作液孵育：未经固定的新鲜组织冰冻切片自然晾干，PH10.4的工作液孵育5min，倾去孵育液，PH9.4的工作液孵育30min。

　　3、CaCL2染色：倾去孵育液，CaCL2溶液处理3次，每次2min。

　　4、硝酸钴染色：硝酸钴作用5min，流水冲洗5min。

　　5、硫化铵染色：1%硫化铵溶液处理30s，流水冲洗5min。

　　6、脱水封片：切片依次入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明，中性树胶封片。

　　7、显微镜镜检，图像采集分析。

　　三、结果判读：

　　Ⅰ型呈浅灰色或无色，Ⅱ型呈深灰或黑色，分型清楚。

　　四、注意事项：

　　1、切片一定要是新鲜组织的冰冻切片，不可以固定。

　　2、Tris碱、氯化钙粉剂常温保存，硫化铵常温避光保存，ATP钠盐-20℃保存，其它染液4℃保存，使用前先复常温。

　　3、工作液和1%硫化铵溶液要现配现用，不能保存。