杭州浩克生物一、实验器材及试剂
1、实验器材
| 名称 | 厂家 | 型号 |
| 脱水机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JJ-12J |
| 包埋机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JB-P5 |
| 病理切片机 | 上海徕卡仪器有限公司 | RM2016 |
| 冻台 | 武汉俊杰电子有限公司 | JB-L5 |
| 组织摊片机 | 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 | KD-P |
| 烤箱 | 上海福玛实验仪器有限公司 | DGX-9003B |
| 载玻片及盖玻片 | 江苏世泰实验器材有限公司 | 10212432C |
| 微波炉 | 格兰仕微波炉电器有限公司 | P70D20TL-P4 |
| 脱色摇床 | 北京市六一仪器厂 | WD-9405A |
| 涡旋混合器 | 天悦电子 | TYXH-II |
| 移液枪 | Dragon | KE0003087/KA0056573 |
| 组化笔 | Gene tech | GT1001 |
| 倒置荧光显微镜 | 日本尼康 | Nikon Eclipse Ti-SR |
| 成像系统 | 日本尼康 | Nikon DS-U3 |
2、主要实验试剂
| 试剂 | 厂家 | 货号 |
| 无水乙醇、二甲苯 | 国药集团化学试剂有限公司 | |
| EDTA（PH8.0)抗原修复液 | 谷歌生物 | |
| EDTA(PH9.0)抗原修复液 | 谷歌生物 | G1203 |
| 柠檬酸（PH6.0)抗原修复液 | 谷歌生物 | G1202 |
| PBS缓冲液 | 谷歌生物 | G0002 |
| BSA | solarbio | A8020 |
| 荧光二抗（FITC、CY3） | 谷歌生物 | |
| DAPI | 谷歌生物 | G1012 |
| 抗荧光淬灭封片剂 | 谷歌生物 | G1401 |
二、石蜡切片免疫荧光实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。
2、抗原修复：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火至沸后断电间隔10min中低火至沸，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定)
3、加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)
4、加二抗：玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织，避光室温孵育50min。
5、DAPI复染细胞核：玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
6、封片：玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
7、镜检拍照：切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。
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