Trans Plus 细胞转染试剂

制胶 蛋白质生物学 试剂

• 价格¥690
• 规格1ml
• 货号HKR063
• 单位支
• 品牌HaoKebio

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【产品信息】

【产品简介】

Trans Plus 细胞转染试剂，作为新一代的转染试剂，其转染原理是带正电的聚合物与核酸分子的带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后，与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。

本产品经过本公司的优化处理，具有转染效率高，细胞毒性低，操作简单，重复性好，适用范围广等特点 

【储存与运输】

蓝冰运输， 4℃保存，有效期一年。（不可冰冻）

【使用方法】
使用方法（以 24 孔板为例，其他培养皿中转染请参考表 1）

1． 接种细胞

对于贴壁细胞，转染前 18-24 h 进行铺板（不含抗生素），使其在转染时的密度大约在 80%左右。对于悬浮细胞，转染当天，在配制 Trans-DNA 复合物之前进行铺板，每 500 µL 生长培养基中加入 4~8×105cells。

【注】：培养液中的血清不影响转染效率。转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

2．准备 Trans-DNA 复合物

(1) 对于每孔细胞，将 1 μg 质粒 DNA 稀释到 40 μL 无血清的高糖 DMEM 培养基（或OPTI-MEM I 培养基），混匀。

(2) 对于每孔细胞，将 3 μL Trans 转染试剂稀释到 40 μL 无血清的高糖 DMEM 培养基（或者 OPTI-MEM I 培养基），轻轻混匀。

【注】：无血清的高糖 DMEM 培养基是稀释液，不能使用含血清的培养基进行 DNA 和 Trans转染试剂的稀释。因为 Trans-DNA 转染复合物的形成过程不能含有血清。

(3) 将稀释好的 Trans 转染试剂尽快全部加入到已稀释好的质粒 DNA 中，轻轻混匀。

【注】：此混合的顺序不能反向进行。

3．转染细胞

(1) 将上述 80 μL Trans-DNA 转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微振荡，让 Trans-DNA 复合物分散均匀。

(2) 在 37℃，5% CO2 培养箱培养 6-18 h，去除含 Trans-DNA 复合物的培养液，更换新的培养液，继续培养至对转入基因表达分析。

【注意事项】

1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2. 质粒质量：请务必使用高纯度无内毒素转染级质粒。通过 260 nm 光吸收测定 DNA 浓度，260nm / 280 nm 比值确定 DNA 纯度（比值应该在 1.8～2.0 的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

3. 细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保细胞没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用李记生物的胎牛血清（货号：AC03L055）培养细胞。

4. 细胞培养液要求： Trans 细胞转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前不需要换培养基。但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释 DNA 和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。确保细胞培养液没有被细菌、真菌或支原体污染。转染时培养液中不添加抗生素。

5. 试剂用量的优化：DNA 浓度和转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，初次使用应优化 DNA 浓度和转染试剂量以得到最大的转染效率。使用者可尝试每 1 μg DNA 使用 1～4 μL 体积 Trans 细胞转染试剂进行优化。DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是 1:2~1:5。

表 1：不同培养体积对应的待转 RNA、 Trans、稀释液用量

使用时 DNA（μg）: Trans 细胞转染试剂（μL）比值保持在 1:2~1:5。