RIPA 总蛋白裂解液

蛋白质生物学 试剂

• 价格¥120
• 规格100ml
• 货号HKW2011
• 单位瓶
• 品牌HaoKebio

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【产品简介】

RIPA 裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一种传统的细胞及组织快速裂解液。RIPA解液裂解组织、细胞得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGE、 Western 等对蛋白活性没有严格要求的实验。

本产品主要成分包含 50 mM Tris-HCl (pH 7.4)，150 mM NaCl， 1 mM EDTA，1mM EGTA,1% NP-40、5%甘油。本产品适用于动物或植物组织及细胞样品， 也可用于真菌或细菌样品。

【产品组成 】

【储存与运输】

冰袋（wet ice）运输；4℃避光保存，有效期 18 个月。

【使用方法】

自备蛋白酶抑制剂。RIPA 裂解液在临用前需加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解。以下使用方法中提到的 RIPA 裂解液均指已添加蛋白酶抑制剂。

组织样品实验：

1.组织块用预冷 PBS洗涤，去除血污，剪成细小碎块置于匀浆器中。

2. 加入 10 倍组织体积 RIPA 裂解液低温匀浆。注意，RIPA 裂解液的使用量可按照约每 50 mg 组织与 1 mL 裂解液的比例添加。如组织蛋白含量较低，可降低裂解液的用量，以提高粗提溶液中的蛋白浓度。

3.将匀浆液转移至 1.5 mL 离心管中，振荡。冰浴 30 min，期间每 10 min 用移液器反复吹打，确保组织细胞完全裂解。

4. 12000 g离心 5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。

贴壁细胞样品实验：

1. 用 PBS 清洗细胞 2-3 次，最后一次彻底吸干残留液。
2. 按照 6 孔板每孔细胞 250 μL 裂解液的比例吸取 RIPA 裂解液于细胞培养板、瓶内，反复晃动培养板或瓶，使裂解液与细胞充分接触 3-5 min。
3. 用细胞刮刀将细胞刮下，收集到离心管中。
4. 12000 g 离心 5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。

悬浮细胞样品实验：

1. 离心收集细胞。
2. 按照 6 孔板每孔细胞 250 μL 裂解液的比例将细胞液与 RIPA 裂解液混合，振荡。
3. 冰浴 30 min，期间每 10 min 用移液器反复吹打数次，确保细胞完全裂解。
4. 12000 g 离心 5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。

细菌或真菌样本实验：

1. 取 1 mL 菌悬液，离心去上清，PBS 洗涤一次，充分去除液体。涡旋使菌体尽量分散。
2. 加入 100-200 μL RIPA 裂解液，轻轻涡旋使菌体与裂解液充分混匀。
3. 冰浴 10 min，期间每 2 min 用移液器反复吹打数次，确保菌体完全裂解。
4. 12000 g 离心 5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。

【注意事项】

1. 组织或细胞裂解时若会出现粘稠状。可用移液器反复吹打或振荡器振荡，直至呈液状为止。如果一直较稠，可再加入适量裂解液。
2. 本试剂不含有蛋白酶抑制剂，需自备蛋白酶抑制剂并在临用前加入。
3. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。