| 品牌 | 商品编码 | 商品名称 | 规格 | 价格 |
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| HaoKebio | HKI0021 | Edu染色试剂盒（绿，AF488) | 100T | ￥700 |
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【产品简介】
EdU(5-ethynyl-2′ -deoxyuridine)，中文名为 5-乙炔基-2′ -脱氧尿苷，是一种胸腺嘧啶 核苷类似物，在细胞增殖时能够替代胸苷(胸腺嘧啶脱氧核苷，thymidine) 插入正在复制的 DNA 分子中， EdU 上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针(如Azide Alexa Fluor 488 等) 通过一价铜离子催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速，被称作点击反应 (Click reaction)，从而可以进行高效快速的检测细胞增殖，特别是可以有效地检测处于 S 期 的细胞百分数。
本试剂盒中荧光探针为绿色荧光，最大激发波长为 491 nm，最大发射波长为 516 nm，处 于增殖的细胞被标记后，细胞核会显示出明亮的绿色荧光，通过配套常规细胞核染料共同标记 细胞核，可用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等仪器直接观察细胞增殖情况；也可以使用流式 细胞仪检测体外培养细胞群荧光强度，根据荧光强度，来判断细胞周期中 S 期的 DNA 复制活性。
【储存与运输】
冰袋运输，-20˚C 储存，可稳定储存一年【使用方法】
动物 EdU 注射
对于小鼠，可以按照 10-200mg/kg 的用量，把 EdU 用 PBS 配制成一定浓度，腹腔注射、特定组 织或器官局部注射或者加入饮用水中。具体用量跟所用动物的种类、体重和使用方式有关，可 以参考相关文献，因此初次使用时建议对 EdU 的使用浓度进行一定的摸索，或者直接使 50mg/kg 的浓度进行测试。
注射方式:依据客户实验而定，如腹腔注射，皮下注射，肌肉注射，尾静脉注射等，其中以腹腔 注射为多。6 小时后或根据特定实验确定适当的时间后，快速处死小鼠，取出所需组织，按照 常规步骤制作冰冻切片或石蜡切片。EdU 标记的时候也可参考相关文献自行调整。建议任何实 验均可取小肠组织检测细胞增殖情况，小肠上皮组织细胞增殖快，成年小鼠 EdU 注射 6 小时后 即可检测到阳性信息，可用作阳性对照进行预实验。
切片处理
切片前处理：组织器官最好进行清洗，以去除血液、组织中残留的EdU，降低背景。
切片厚度：3-10μm 为宜，切片过厚可能会影响切片背景。
切片后处理：
石蜡切片脱蜡：二甲苯脱蜡 2 次，15 分钟/次，乙醇梯度 (100%，95%，85%，75%) 洗脱各一次， 5 分钟/次，去离子水洗脱 1 次。
冰冻切片处理：室温放置 30 分钟后，固定 10 分钟，PBS 清洗 3 次，每次 5 分钟。
Edu 反应
按照 PB:CU:绿色色原：AC=860:40:1:100 的比列配制 EdU 反应液。 (反应液现配现用)
每片组织滴加 50-100 μl 的 EdU 染色反应液，室温避光孵育 15 分钟，弃染色反应液，PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
其他染色
客户可以根据需要进行细胞表面或者细胞内抗原染色。
DAPI 染色
每片组织加入 50-100ul DAPI 染色液，染色 15 分钟，PBS 洗脱三次，每次 5 分钟。
图像拍照
染色完成后建议立刻观察，使用荧光显微镜或共聚焦显微镜采集图像，本试剂盒荧光染料 AF488 对应的光谱特性为 Ex/Em：491 nm/516 nm (绿色) ；DAPI 染色液对应的光谱特性为 Ex/Em：
358 nm/461 nm (蓝色) 。
【注意事项】
1. 对于体外培养细胞，具体 EdU 使用浓度、孵育时间随样品以及研究目的的不同，可进行 适当调整。
2. 部分组织细胞增殖速度缓慢，为了排除造模效果不佳等因素，建议选增殖快的组织样品作 为参照样本 (如肠道组织)。
3. 如果背景颜色过深，可能是实验中洗涤不充分、组织样品固定时间过长、固定液残余导致。
4. 催化剂 AC 颜色发生轻微变化，点击反应催化体系依旧能够正常进行，如呈现棕色，表明 该组分已失效，请弃用。
5. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。
杭州浩克生物
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