产品目录 | 主要成分 | 产品规格 |
反应缓冲液 | 酒石酸钾钠 | 20ml |
副品红溶液 | 副品红 | 1ml |
亚硝酸钠溶液 | 亚硝酸钠 | 1ml |
AS-BI 磷酸盐底物溶液 | 萘酚 AS-BI 磷酸盐 | 1ml |
【主要用途】
抗酒石酸酸性磷酸酶染色,又称 Trap 染色,是用于检测骨、骨细胞中破骨细胞的染色, 使破骨细胞呈红色,细胞核浅蓝色,用以显示破骨细胞的分布及数量变化。
【产品简介】
抗酒石酸酸性磷酸酶 (tartrate resistant acid phosphatase,TRAP) 是破骨细胞 的标志性酶,特异性分布于破骨细胞中。TRAP 染色试剂盒即是用于显示组织中的破骨细胞。 其中基本原理在于,在含酒石酸的酸性条件下,抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 能将萘酚 AS-BI 磷酸盐水解,产生的萘酚 AS-BI 与六偶氮副品红结合,形成非水溶性的酒红色物质沉积在 酶活性原位,从而实现对抗酒石酸酸性磷酸酶的显色和定位。
本产品基本组成成分:反应缓冲液;副品红溶液;亚硝酸钠溶液;AS-BI 磷酸盐底物 溶液。经本产品染色后,破骨细胞中的TRAP 呈酒红色,定位于细胞浆。按照切片上每个 组织点 300 μL 用量,本试剂盒可以做 50 次以上 TRAP 染色。
【储存与运输】
本产品冰袋运输;4℃避光保存,其中 AS-BI 磷酸盐底物溶液-20℃保存,有效期 12 个月。
【使用方法】
配制 TRAP 工作液:
(1) 取 50 μL 副品红溶液与 50 μL 亚硝酸钠溶液在洁净离心管中混匀,得到六偶氮副 品红溶液;
(2) 向第 1 步的 100μL 六偶氮副品红溶液中加入 100 μLAS-BI 磷酸盐底物溶液,吹吸数 次充分;
(3) 吸取 1.8 mL 反应缓冲液加入到第 2 步的混合液中充分混匀;
(4) 第 3 步的混合液经针式滤器过滤 (0.45μm 水系滤膜) 即得到 TRAP 工作液。
注意:务必按照所属顺序配制工作液。每个组织点大约需要 200-300μL 工作液,根据使 用量配制,现配现用,避免浪费。
石蜡切片操作步骤 (供参考)
1.石蜡切片脱蜡至水,纯水洗数分钟。
2.将切片用组化笔化圈后放在 (加有一定量的防止切片蒸干的纯水) 湿盒中,用纯水37℃ 孵育 2h。
3.切片孵育完成后倾去纯水,滴加过滤好的 TRAP 工作液覆盖组织,置于 37℃避光反应 20-30 min。
4. (可选, 自备相关试剂) 复染细胞核:倾去孵育液并水洗,以苏木素染液进行染核。
5.脱水,透明。
6.中性树胶封片。
【注意事项】
1、工作液配制过程中需充分溶解,现配现用。
2、染液应保存在4℃,使用前先常温复温。
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